質粒小量提取試劑盒II型,Plasmid Mini Kit II(200)詳細介紹
上海遠慕專業供應ELISA試劑盒，動物血清血漿，標準品對照品，質粒載體，質粒提取試劑盒，培養基，抗體，化學試劑，生化試劑，實驗耗材，染色液，其他實驗試劑等，代理多款進口（國產）品牌，價格實惠，質量有保證，洽談！
名稱：質粒小量提取試劑盒II型
英文名/型號：Plasmid Mini Kit II(200)
品牌：Omega
供應商：上海遠慕
用途：從小于15ml培養過夜的菌液提取50-70ug高純度質粒DNA
為了滿足生物領域日益增加的要求，Omega新開發的基于磁珠的純化方式，以其高結合力和高純度的核酸產物等*性，已經在歐美市場得到廣泛的接收。Omega的磁珠純化方式，與目前大部分公司采用的硅磁顆粒不同，它采用的是納米磁珠同正離子相藕連而成的微型顆粒，該顆粒的結合能力是傳統硅磁的10-30倍，因而能大大提高核酸產量和純度，目前該產品處于世界zui的水平。此外，為滿足不同客戶的需求，Omega還開發了一些成本較低的核酸純化試劑盒，如鹽析法純化血液或組織基因組DNA純化試劑盒，玻璃奶純化試劑盒以及溶液型的RNA抽提試劑盒。
質粒小量提取試劑盒II型，Plasmid Mini Kit II(200)操作步驟：
1.樣本處理收集已培養1216小時的菌液13ml12000rpm離心1分鐘盡量吸除上清。 注：菌液較多時可以通過多次重復離心將菌體收集到1個離心管中。菌液收集量由菌濃而定收集菌體過多會反而降低裂解效果。
2.懸浮向菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ用移液器反復吹打或渦旋振蕩器*懸浮細菌細胞沉淀。
3.裂解加入250ul溶液Ⅱ于細菌懸液中溫和地上下顛倒6~8次，使菌體充分裂解，加1管混合1管，確保溶液充分、及時的混勻。充分裂解后的菌液會變得相對粘稠為防止DNA斷裂避免劇烈混勻操作及裂解時間過長。
4.中和加入350ul溶液Ⅲ, 立即溫和上下顛倒6~8次充分混勻，加1管混合1管。此時會出現白色絮狀沉淀靜置2分鐘12000rpm離心5分鐘可適當延長至10min。
注：溶液Ⅲ加入后應立即混勻避免產生局部沉淀。若上清液中仍存在微小白色沉淀，可重復離心后取上清。
5.吸附小心地將上清液轉移至吸附柱中12000rpm離心30~60秒，棄收集管中廢液，然后將吸附柱重新套入廢液收集管中。若上清一次加不完，可重復操作轉移時不可吸入沉淀，此步很重要。
6.漂洗向吸附柱中加入600ul漂洗液PW，使用前請檢查是否已加入無水乙醇，12000rpm離心30~60秒。
7.重復步驟6，棄收集管中廢液。
8.將吸附柱套于收集管中10000rpm離心2分鐘。
注：此步驟不可省略，目的是去除吸附柱中殘余的漂洗液，因為漂洗液中乙醇的殘留會影響后續實驗，酶切，PCR等。
9.洗脫將吸附柱置于一干凈的1.5ml離心管中向吸附柱膜中央部位懸空滴加50~100ul溶解液TE或滅菌雙蒸水，pH值在7.0-8.5，室溫靜置2~10分鐘，12000rpm離心2分鐘，即得提取質粒DNA置-20℃保存。
1.使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現混濁，如有混濁現象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復澄清后再使用。溶液Ⅱ 、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即擰緊蓋子。
2.洗脫緩沖液體積不應少于 50ul，體積過小影響回收效率;洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍)， pH值低于7. 0會降低洗脫效率， DNA產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。
3.如果所提質粒為低拷貝質粒或大于 10kb 的大質粒，應加大菌體使用量，使用 5-10ml 過夜培養物，同時按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時可以適當的延長時間，以增加提取效率。
4.DNA濃度及純度檢測： 得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、 操作過程中的剪切力等因素有關。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD 260 處有顯著吸收峰，OD 260 值為 1 相當于大約 50ug/ml雙鏈DNA、 40ug/ml單鏈DNA。OD 260 /OD 280 比值應為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響吸光值，但并不表示純度低。
