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葡聚糖凝膠G-10操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):3601 更新時(shí)間:2018-01-25

上海遠(yuǎn)慕生物詳細(xì)為您介紹葡聚糖凝膠G-10操作步驟,分離技巧及其他咨訊說(shuō)明,本司所供應(yīng)的葡聚糖凝膠系列產(chǎn)品有很多,包含有:葡聚糖凝膠LH-20葡聚糖凝膠LH-60,葡聚糖凝膠G-15,葡聚糖凝膠G-25,葡聚糖凝膠G-50,葡聚糖凝膠G-75,葡聚糖凝膠G-100,葡聚糖凝膠G-150,葡聚糖凝膠G-200,更多產(chǎn)品請(qǐng)!

 

中文名:葡聚糖凝膠G-10

中文別名:交聯(lián)葡聚糖凝膠G-10;交聯(lián)右旋糖酐凝膠G-10

英文名:Sephadex G-10

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

包裝:25g,100g,500g

PH:2~13

保存:RT

干顆粒直徑:40~120um

床體積毫升/克干分子篩:2~3ml/g

性狀:白色珠粒或粉末,屬親水性凝膠;性穩(wěn)定,不溶于水,弱酸和堿溶液,遇強(qiáng)酸能使糖苷鍵分解

葡聚糖凝膠G-10操作步驟

葡聚糖凝膠G-10

 

葡聚糖凝膠G-10操作步驟

1、乙醇浸泡在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí);并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無(wú)鹽水洗去殘存的乙醇濾干。

2、無(wú)鹽水浸泡室溫下,在無(wú)鹽水中充分溶脹24小時(shí),間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹。

3、鹽酸浸泡在常溫下再用0.1MHCl浸泡12小時(shí),間隙攪拌,濾干,水洗只中性。

4、裝柱將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層。

5、平衡上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。

6、上樣凝膠過(guò)濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積;柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm以下,過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免;難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時(shí)高徑比為5:1即可。

7、洗脫方法可以用無(wú)鹽水,也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。

8、清洗每次用完之后,將柱子里的緩沖液置換為去離子水,然后用20%的乙醇封存。

9、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白;方法是以40cm/h用0.1M氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積,再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。

 

葡聚糖凝膠G-10分離技巧

1、分離時(shí)流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達(dá);接餾分時(shí)可開(kāi)全速,節(jié)省時(shí)間。

2、柱子盡可能長(zhǎng),葡聚糖凝膠柱長(zhǎng)的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。

3、餾分一定要接的細(xì),可1/10,或1/20 個(gè)保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積,對(duì)特殊保留強(qiáng)的化合物,可洗脫5個(gè)保留體積。

5、鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重,如不在乎填料者,可用SephadexLH20分鞣質(zhì)。

6、葡聚糖凝膠對(duì)黃酮類成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻(xiàn)參考。

7、填料反復(fù)使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來(lái),待用;暫時(shí)不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用;如長(zhǎng)期不用時(shí),可在以上處理基礎(chǔ)上,減壓抽干,再用少量乙迷洗凈抽干,室溫充分揮散至無(wú)醚味后,60~80°C干燥后保存。

 

葡聚糖凝膠G-10說(shuō)明:

葡聚糖凝膠有不同的粒度!超細(xì)級(jí)的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜,粗級(jí)和中級(jí)的凝膠用于制備性色譜過(guò)程,可在較低的壓力下獲得較高的流速;另外,粗級(jí)也可用于批量工藝。

化學(xué)穩(wěn)定性葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學(xué)降解);它在水,鹽溶液,堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的,在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解;長(zhǎng)期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應(yīng)避免使用。

物理穩(wěn)定性葡聚糖凝膠并不熔融,可以在濕態(tài),中性PH進(jìn)行滅菌;干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開(kāi)始焦糖化,葡聚糖凝膠的機(jī)械強(qiáng)度取決于交聯(lián)度。

G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度,因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同;葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

 

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