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鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.參數(shù)說明
中文名：鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.
英文名：Ni Sepharose H.P.
供應商：上海遠慕
產(chǎn)地：進口，國產(chǎn)
工作PH值：3-12
結(jié)構(gòu)成分：6%交聯(lián)瓊脂糖
平均粒徑：34µm
操作溫度：4-30℃
配基基團：Ni2+
配體密度：15μmol/ml
保存溫度：4℃
凝膠類型：小配體親和色譜填料
性狀：凝膠狀，保存在20%酒精溶液中
應用：分離帶His標簽的重組蛋白及能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白，高分辨率。
鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法及注意事項說明
鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 說明
鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 是用于純化6×His標簽重組蛋白的一種純化介質(zhì)，它是由6%交聯(lián)的Sepharose耦連了一種四齒螯合劑NTA而得；它可用于在非變性或變性條件下純化任何表達系統(tǒng)表達的6×His標簽重組蛋白。NTA，含有四個螯合區(qū)，較一般的三齒螯合劑能更好的結(jié)合Ni2+；6×His可與Ni2+螯合，從而使His標簽蛋白結(jié)合在Ni-NTA純化介質(zhì)上，未結(jié)合的蛋白被洗滌下去，結(jié)合在介質(zhì)上的蛋白經(jīng)過一定濃度的咪唑或低pH緩沖液的溫和洗脫下來，從而得到高純度的目的蛋白；該純化介質(zhì)與His標簽蛋白具有*的親和力，可達5-20 mg/mL。可在非變性和變性條件下純化任何表達系統(tǒng)所得的His標簽蛋白；純化程序簡單，所得的蛋白純度可高達95%；Ni-NTA可再生4-6次，重復使用。本產(chǎn)品懸浮液為20%乙醇，已螯合Ni2+。
鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法
1、乙醇浸泡：在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2、無鹽水浸泡：室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹，然后;
3、鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾干，水洗只中性;
4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;
5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當盡可能避免；難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1即可;
7、洗脫方法：可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;
8、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白；方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。
鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 注意事項
1、一般都用藥匙取用。藥匙的兩端為大小兩個匙，分別取用大量固體和少量固體。
2、試劑一旦取出，就不能再倒回瓶內(nèi)，鎳NTA瓊脂糖凝膠6FF可將多余的試劑放入容器。
3、稱量的天平應保持清潔、干燥，避免潮濕及腐蝕性氣體的侵蝕。在進行稱量操作時，被稱取的試劑應置于稱量紙上或其它器皿內(nèi)，不可在盤中直接稱量。
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