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豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒說明書
點擊次數:895 更新時間:2018-04-17

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【參數說明】

中文名:豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒

中文別名:豬血管生成素1(ANG-1)ELISA Kit

供應商:上海遠慕

規格:48t/96t

保存:2-8℃

有效期:6個月

銷售優勢:量大從優、質量保證。

特點:敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩定、易保存,操作簡便。

用途:用于測定血清,血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。

檢測種屬:大小鼠、人、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨ELISA試劑盒等種屬。

常見ELISA試劑盒:白介素、選擇素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、干擾素、轉化生長因子、趨化因子、細胞因子受體、粘附分子、生長因子、凋亡因子等等。

 

【技術原理】

1、抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

2、結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

3、酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。

4、受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。

5、此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。

6、加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復性好,以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。

 

【組織結構】

1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心12分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心60分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液:1000×g離心32分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心33分鐘,取上清液。

5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

【操作步驟】

1、編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)。

2、加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4、配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用。

5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘。

8、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

9、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

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