PEG1500溶液(50%,無菌) 說明書由上海遠(yuǎn)慕提供，本司現(xiàn)貨供應(yīng)不同類別的溶液產(chǎn)品，包含：結(jié)晶紫飽和甲醇溶液,結(jié)晶紫水溶液(0.5%),龍膽紫水溶液(0.5%),龍膽紫水溶液(0.1%),固綠染色液(0.5%),苯酚水溶液(5%)，更多溶液系列請(qǐng)！
PEG1500溶液(50%,無菌) 說明書
【信息說明】
產(chǎn)品名稱：PEG1500溶液(50%,無菌)
供應(yīng)商：遠(yuǎn)慕生化試劑廠家
規(guī)格：10ml 5×10ml
分類：細(xì)胞培養(yǎng)
儲(chǔ)存條件：4℃,6個(gè)月
用途：聚乙二醇可用作融合劑,以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞雜交，同sigma10783641001。
注意事項(xiàng)：無菌溶液，由HEPES和PEG1500或稱聚乙烯醇1500組成,經(jīng)過濾除菌。
【操作步驟】
1、如果變成膠凍狀,可37~60℃水浴使其變成溶液。
2、單層貼壁細(xì)胞:將雜交前體細(xì)胞以相同數(shù)量(5×104/ml)接種,以適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,待細(xì)胞貼壁擴(kuò)展至匯合成片(80%匯合率)的密度。
3、吸干培養(yǎng)液,加入PEG1500溶液(50%,無菌),輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)1min使PEG1500溶液覆蓋所有細(xì)胞。
4、靜置1min,加入5ml*MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1500溶液,棄上清液，用補(bǔ)加1×HT和1×A的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞。
5、融合12~24h后進(jìn)行異核體分析，雜交前體細(xì)胞在4~5天內(nèi)發(fā)生死亡，對(duì)于大多數(shù)融合前體細(xì)胞而言，10~14天可見雜交細(xì)胞克隆。
6、懸浮細(xì)胞：將兩種不同親體的細(xì)胞各1ml(約為1×107)混勻，離心以沉淀雜交前體細(xì)胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細(xì)胞混勻并重新懸浮。
7、1000g離心，棄上清液，加入*MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1500溶液，吸干凈稀釋的PEG1500溶液；用無血清MEM培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細(xì)胞(不要破壞細(xì)胞)，1000g離心5min，棄上清液，重復(fù)1次該步驟。
8、加入含有20%的胎牛血清的HAT選擇培養(yǎng)液，混勻，將細(xì)胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×104/ml,接種于96孔板(每孔0.1ml)或其他器皿中，37℃5%CO2孵育過夜后選出融合細(xì)胞。
【注意事項(xiàng)】
1、應(yīng)注意無菌操作，避免被微生物污染。
2、PEG1500溶液較為粘稠時(shí)，可37~60℃水浴使其變成溶液。
3、體外培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細(xì)胞。
4、如需HAT選擇系列產(chǎn)品，可選擇LeageneAMediaSupplement(50×)、HTMediaSupplement(50×)、HATMediaSupplement(50×)。
5、請(qǐng)嚴(yán)格按照PEG1500溶液(50%,無菌)說明書上的要求進(jìn)行規(guī)范化操作。
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