慢病毒不但可感染分裂或非分裂細(xì)胞，還可將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實(shí)現(xiàn)持久表達(dá)，又很少引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)。被譽(yù)為「細(xì)胞實(shí)驗(yàn)首.xuan、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)*」工具病毒。
并且作為基因載體在治療各類(lèi)遺傳性和后天性的人類(lèi)疾病中倍受歡迎：從基礎(chǔ)研究發(fā)展到臨床階段，高濃度、高感染效率的慢病毒都是感染細(xì)胞表達(dá)（或沉默）目的基因的理想分子工具。
那么慢病毒在感染細(xì)胞中有什么優(yōu)良表現(xiàn)呢？
慢病毒感染細(xì)胞的步驟一般是這個(gè)樣子的，以「24 孔培養(yǎng)板、貼壁細(xì)胞」為例：
Day0: 接種細(xì)胞
每孔按 5×104 個(gè)待感染細(xì)胞鋪板，用含有 10% FBS 的 DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng);
Day1: 細(xì)胞感染
感染前，根據(jù)說(shuō)明書(shū)用*培養(yǎng)基配置感染液，備用吸掉舊培養(yǎng)基，更換為感染液; 并參考細(xì)胞 MOI 值，計(jì)算病毒使用量，加入病毒進(jìn)行感染，混勻;
Day2
病毒感染 8~16 h 后，換回常規(guī)培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng);
Day3~4: 確認(rèn)感染效果
感染 72 h 后，顯微鏡下觀察感染效果，如 EGFP、Cherry 的表達(dá)情況；
如果都這么簡(jiǎn)單的話(huà)，那你真的是 too young too simple！
那么在慢病毒感染細(xì)胞過(guò)程中，到底會(huì)遇到哪些問(wèn)題呢？此貼統(tǒng)統(tǒng)幫您搞定~~
難感染問(wèn)題該如何解決？
對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等，可以通過(guò)添加病毒感染增強(qiáng)液來(lái)顯著提高轉(zhuǎn)染效率。
除了難感染外，感染效率低和加入慢病毒后，細(xì)胞死亡也是科研的又一攔路虎。
針對(duì)加入慢病毒后，細(xì)胞死亡很厲害，該如何處理？
這種情況是由于慢病毒對(duì)該細(xì)胞有一定的毒性作用，需要調(diào)整并降低感染的 MOI 值，并且在感染后 4 小時(shí)、8 小時(shí)、12 小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀察，若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)變差時(shí)，則需要立刻對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液操作，使用新鮮的*培養(yǎng)液替換病毒感染培養(yǎng)液。
如何提高慢病毒對(duì)細(xì)胞的感染效率？
慢病毒對(duì)細(xì)胞的感染效率受多個(gè)因素影響，如細(xì)胞自身生長(zhǎng)的狀態(tài)，細(xì)胞數(shù)量，細(xì)胞被慢病毒感染的難易程度等。因此保證細(xì)胞正常增殖，輪廓清晰，合適的細(xì)胞密度，選擇you的感染條件可以更好的保證感染效率。對(duì)于懸浮細(xì)胞，可采用離心感染方法，減少病毒感染時(shí)的體積，從而提高感染效率。如將細(xì)胞培養(yǎng)板密封后，用平角轉(zhuǎn)子離心機(jī) 1000 g 離心 1 h，再放回培養(yǎng)箱中正常培養(yǎng)。
