細(xì)胞增殖（Cell proliferation）是細(xì)胞生命活動(dòng)的重要特征之一。細(xì)胞增殖直觀的表現(xiàn)是細(xì)胞分裂（cell division）,即由原來(lái)的一個(gè)親代細(xì)胞（mother cell）變?yōu)閮蓚€(gè)子代細(xì)胞（daughter cell），使細(xì)胞的數(shù)量增加。各種細(xì)胞在分裂之前，還必須經(jīng)過(guò)一定的物質(zhì)準(zhǔn)備。物質(zhì)準(zhǔn)備和細(xì)胞分裂是一個(gè)高度受控的相互連續(xù)的過(guò)程。這一相互連續(xù)的過(guò)程即為細(xì)胞增殖。新形成的子代細(xì)胞再經(jīng)過(guò)物質(zhì)準(zhǔn)備和細(xì)胞分裂，又會(huì)產(chǎn)生下一代的子細(xì)胞。這樣周而復(fù)始，使細(xì)胞的數(shù)量不斷增加。因而，細(xì)胞增殖過(guò)程也稱為細(xì)胞周期（cell cycle）。

      目前在人體中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)25種周期蛋白。這些周期蛋白在細(xì)胞周期內(nèi)表達(dá)的時(shí)相有所不同，所執(zhí)行的功能也多種多樣。各種周期蛋白之間有著共同的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，它們均含有一段相當(dāng)保守的氨基酸序列，成為周期蛋白框（cyclin box）,介導(dǎo)周期蛋白與CDK結(jié)合。

圖1：部分周期蛋白分子結(jié)構(gòu)特征

細(xì)胞計(jì)數(shù)法

圖:2：細(xì)胞計(jì)數(shù)法

細(xì)胞直接計(jì)數(shù)法是檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法之一，簡(jiǎn)單易操作，也非常*，只是耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，所需細(xì)胞量多。無(wú)法區(qū)分增殖細(xì)胞和非增殖細(xì)胞，但是可在此基礎(chǔ)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

MTT法

MTT商品名為噻唑蘭，是淡黃色的底物，可以被活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶（SDH）還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶Formazan并沉積在細(xì)胞中。而剛死亡的細(xì)胞則不能剪切足夠的MTT。

特定溶劑（如DMSO）能溶解細(xì)胞中的Formazan，用酶標(biāo)儀在570nm測(cè)定其光吸收值。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，F(xiàn)ormazan結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。此法相較于其他方法更加直觀，操作簡(jiǎn)單。

CCK-8法

圖3：WST-8檢測(cè)原理圖 (EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑)

目前比較常用的還有CCK-8法，CCK-8是一種類似于MTT的化合物，是MTT的升級(jí)替代產(chǎn)品。在電子耦合試劑（EC）存在的情況下，活細(xì)胞線粒體中的SDH能使外源性WST-8還原為水溶性的橙黃色Formazan溶液，而死細(xì)胞無(wú)此功能。

BrdU/EdU摻入法

圖4：BrdU法和BeyoClick™ EdU法檢測(cè)原理的比較

*的的檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法是直接檢測(cè)細(xì)胞中DNA的合成。

初廣泛使用的通過(guò)檢測(cè)DNA合成來(lái)檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法是放射性標(biāo)記核苷摻入法，如氚標(biāo)記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)摻入法。但該方法由于有放射性污染并且很難實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞檢測(cè)而受到很大的限制，隨后逐漸被基于抗體檢測(cè)的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU（DNA前體胸腺嘧啶的類似物）可代替胸腺嘧啶摻和到DNA合成期（S期），而后利用抗Brdu單克隆抗體，未變性的雙鏈DNA可用PI染色，顯示增殖細(xì)胞。同時(shí)結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物，雙重染色，可判斷增殖細(xì)胞的種類，增殖速度，對(duì)研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)有重要意義。但是由于BrdU法步驟繁多，且需要使用BrdU抗體，影響因素較多，穩(wěn)定性比較差。EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)，中文名為5-乙炔基-2' -脫氧尿苷，是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine)類似物，EdU可以在DNA合成過(guò)程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。

圖5：BeyoClick™ EdU檢測(cè)法中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction)原理圖

另一方面，EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotin labeled azide)通過(guò)一價(jià)銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction)。EdU法基于EdU摻入和后續(xù)的點(diǎn)擊反應(yīng)，無(wú)需使用抗體、操作便捷、檢測(cè)靈敏度高，是一種在BrdU法基礎(chǔ)上升級(jí)換代的新方法。

化學(xué)發(fā)光法

圖6：化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)ATP的原理圖

ATP作為重要的能量分子，是細(xì)胞新陳代謝的一個(gè)重要指標(biāo)，也是具有代謝活性細(xì)胞的重要標(biāo)志性分子，并和活細(xì)胞數(shù)目成良好的線性關(guān)系。因此，ATP含量能很好地反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)目，并且，ATP法簡(jiǎn)單、快捷且靈敏，非常適合高通量研究，是許多藥物篩選實(shí)驗(yàn)的首xuan。

該方法大的優(yōu)點(diǎn)在于檢測(cè)靈敏度特別高，可以檢測(cè)到低至約12個(gè)細(xì)胞，并且檢測(cè)速度非?？?約十分鐘就可完成一個(gè)96孔板的檢測(cè))，特別適合用于高通量檢測(cè)。CTL和CTL Plus兩者相比，CTL Plus的檢測(cè)上限更高，線性范圍更寬，并且發(fā)光值隨時(shí)間的穩(wěn)定性也更高一些。經(jīng)費(fèi)非常充裕時(shí)推薦使用CTL Plus，但CTL在96孔板中單孔的細(xì)胞數(shù)量不超過(guò)3萬(wàn)時(shí)也能滿足常規(guī)的高通量檢測(cè)需要。