酶聯免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測方法，與儀器分析技術相比具有快速、簡便、確和靈敏度高等特準點，但對實驗操作條件的要求比較嚴格。實驗條件主要由實驗室的操作環境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但EIA試劑盒對實驗室操作環境的要求是幾種藥物殘留 LS檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的，人為的誤差相對嚴重一些。本人結合幾年的工作實踐介紹一下進行ELISA實驗操作的時候應該注意的問題。

酶聯免疫試劑盒操作的通用的規則：

1.孵育的時間應該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準；

2.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性；

3.又能反映出試劑盒的精密度；

4.對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行；

5.驗證

沒有去離子水或雙蒸水時：

1.可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水；

2.使用試劑盒時出現問題的解決辦法；3.

檢測的結果沒有吸光度值或吸光度值很低 .可能引起的原因有試劑盒已過有效期、使用的試劑盒內 容物不是同一個批次的、加入酶標記物、劑盒的內容物沒試；

4.要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子，天平進行確定 (由于蒸餾水不含雜質，溫度環境為 2%左 0右時，m l L的水可以看作是 l、0 L的水可以看作是 g20 02 )每一把微量加樣器都應該將其zui高量程和zui低量程 .g進行確定。

1.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換；

2槍頭，即使吸取標準品溶液。 1吸取液體時速度不易太快；

3.以免產生氣泡，吸取的量不 夠準確。

沒有充分的回溫、孵育的溫度太低等，對應的解決辦法是相更換成在有效期以內的試劑盒、使用同一個批次的試劑盒的內容物、照試劑盒說明書中的步驟進行操作、按將試劑盒的內容物充分的回溫后再進行操作、在實驗操作的整個過程中請仔細觀察恒溫箱的溫度。

       標準曲線的線性不好，或平行性不好 ( .雙孔對照孔的 O D值差別很大)或 出現跳孔的現象，可能引起的原因有酶標板孔間相互污染、洗板后未能盡快進行下一步操作、添加樣品或其它試劑時操作的方法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發、酶標板孔問加入的試劑量不同，對應的解決辦法是加相樣時請小心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請小心， 勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、添加試劑時請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內，吸取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、確認孵育環境不透光，蓋板膜將酶標板密封好、使用已校正過的微量加樣器，如將*次加入液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑壁接觸， L液滴會自然流下去。吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。