熒光染料是細(xì)胞生物學(xué)等科學(xué)研究中*的重要工具，熒光濾色塊是熒光顯微鏡中至關(guān)重要的一個(gè)部件。我們大家在操作熒光染料亮度的時(shí)候，我們可以按照上面的比較方法去比較熒光染料的亮度，那么一般熒光染料亮度怎么進(jìn)行比較?
熒光染料的亮度可以用來比較不同熒光染料的熒光標(biāo)記效果，通過陰性細(xì)胞群與陽性細(xì)胞群的熒光信號之間的關(guān)系來表示。但陰性細(xì)胞群的熒光信號受到信號強(qiáng)度、自發(fā)熒光、非特異性染色、儀器的電子噪聲等多個(gè)因素相關(guān)。
熒光染料染色指數(shù)是陽性細(xì)胞群的平均熒光強(qiáng)度與陰性細(xì)胞群的平均熒光強(qiáng)度之差與陰性細(xì)胞群熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)差之間比值的一半。熒光染料染色系數(shù)只和抗體克隆與質(zhì)量、熒光團(tuán)純度與質(zhì)量、熒光修飾比、激光線及其功率、長通和帶通濾光片、目的細(xì)胞等因素相關(guān)。
熒光染料的染色指數(shù)與熒光染料的亮度呈正相關(guān)，也就是熒光染料亮度越高，染色系數(shù)也就高。
DNA染料：
圖1.用Cell Navigator™脂質(zhì)液滴熒光測定試劑盒（Cat＃22735）和Nuclear Green™LCS1（Cat＃17540）染色的油酸處理過的HeLa細(xì)胞的熒光圖像。
| 染料名稱 | 標(biāo)記部位 | 激光 | 濾光片組 | 亮度 |
| DAPI（17510） | DNA | 355 nm | DAPI | 6 |
| Nuclear Blue（17548） | DNA | 355 nm | DAPI | 6 |
| Nuclear Green（17540） | DNA | 488 nm | FITC | 6 |
| Nuclear Orange（17541） | DNA | 488 nm | Cy3 | 6 |
| Propidium Iodide（17515） | DNA | 532 nm | Texas Red | 3 |
| Nuclear Red（17542） | DNA | 633 nm | Cy5.5 | 6 |
細(xì)胞增殖染料：
圖2.用CytoTell™Green和CFSE進(jìn)行的細(xì)胞增殖測定。在第0天，用CytoTell™Green或CFSE對Jurkat細(xì)胞（?2×106細(xì)胞/ mL）進(jìn)行染色。在的那天，以1：1的比例連續(xù)通過細(xì)胞。在通過當(dāng)天，在FITC通道中用ACEA NovoCyte 3000流式細(xì)胞儀測量熒光強(qiáng)度。連續(xù)幾代人以不同的顏色代表。
| 染料名稱 | 功能 | 激光 | 濾光片 | 亮度 |
| CytoTell Blue（22251） | 增殖 | 405 nm | DAPI | 6 |
| CFSE（22022） | 增殖 | 488 nm | FITC | 7 |
| CytoTell Green（22253） | 增殖 | 488 nm | FITC | 7 |
| CytoTell Orange（22257） | 增殖 | 488 nm | Cy3/TRITC | 7 |
| CytoTell UltraGreen（22240） | 增殖 | 488 nm | FITC | 7 |
| CytoTell Red 590（22261） | 增殖 | 561 nm | Cy3 | 7 |
| CytoTell Red 650（22255） | 增殖 | 633 nm | Cy5 | 7 |
細(xì)胞活力檢測染料
圖3.用CytoCalcein Violet 500（Cat＃22013）染色的活HeLa細(xì)胞圖像。細(xì)胞核用Hoechst 33342（Blue，Cat＃17535）染色。
| 染料名稱 | 功能 | 激光 | 濾光片 | 亮度 |
| Calcein Blue（22006） | 細(xì)胞活力 | 405 nm | DAPI | 6 |
| Calcein UltraBlue（21908） | 細(xì)胞活力 | 405 nm | DAPI | 6 |
| CytoCalcein Violet 450（22012） | 細(xì)胞活力 | 405 nm | DAPI | 7 |
| CytoCalcein Violet 500（22013） | 細(xì)胞活力 | 405 nm | FITC | 7 |
| Calcein（22001） | 細(xì)胞活力 | 488 nm | FITC | 7 |
| Calcein Orange（22008） | 細(xì)胞活力 | 488 nm | TRITC | 7 |
| Calcein UltraGreen（21905） | 細(xì)胞活力 | 488 nm | FITC | 7 |
| 7-AAD（17501） | 細(xì)胞活力 | 532 nm | Cy5 | 2 |
| Calcein Red（21900） | 細(xì)胞活力 | 561nm | Cy3/TRITC | 7 |
| Calcein Deep Red（21902） | 細(xì)胞活力 | 633 nm | Cy5 | 7 |
熒光標(biāo)記染料
圖4.將 HeLa細(xì)胞與（Tubulin +）或不與（Tubulin-）小鼠抗微管蛋白一起孵育，然后與iFluor™488山羊抗小鼠IgG綴合物（綠色，左）或AlexaFluor®488山羊抗小鼠IgG綴合物（綠色，右）。細(xì)胞核用Hoechst 33342（藍(lán)色）染色。
