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上海遠慕生物科技有限公司

實驗室常用溶液的配制!
點擊次數:2241 更新時間:2020-08-04

一.常用貯液與溶液

1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學試劑級,無DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性,

須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動,直至牛血清蛋白*溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水,分成小份貯存于-20℃。或轉移100mg的二硫蘇糖醇

至微量離心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。

8mol/L乙酸鉀(potassium acetate):溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中,加水定容到100ml。

1mol/L氯-化鉀(KCl):溶解7.46g氯-化鉀于足量的水中,加水定容到100ml。

3mol/L乙酸鈉(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中,用冰乙酸調溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。

1mol/L HEPES:將23.8gHEPES溶于約90ml的水中,用NaOH調pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl:加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份貯存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。

100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基-磺酰氟)于足量的異丙醇中,定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

10mg/mlRnase(無DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl調pH至7.5,于-20℃貯存。(配制過程中要戴手套)

5mol/L氯化鈉(NaCl):溶解29.2g氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。

10N氫氧化鈉(NaOH):溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),氫氧化鈉*溶解后用水定容至1L。

10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至*溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。

100%三氯-乙酸(TCA):在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水,用磁力攪拌器攪拌直至*溶解。(稀釋液應在臨用前配制)

2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用鋁箔包裹裝液管,貯存于-20℃。

二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液

電泳緩沖液

50×Tris-乙酸(TAE)緩沖液

成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量

2mol/L Tris堿 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水  242g 57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L) 200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 補足1L  

5×Tris-硼酸(TBE)緩沖液

成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量

445 mmol/L Tris堿 445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA 水  54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 補足1L  

染料

1%溴酚藍(bromophenol blue)

加1G-水溶性鈉型溴酚藍于100ml水中,攪拌或渦旋混合直到*溶解。

1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)

溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙錠(ethidium bromide)

小心稱取1g溴化乙錠,轉移到廣口瓶中,加100ml水,用磁力攪拌器攪拌直到*溶解。用鋁箔包裹裝液管,于4℃貯存。

凝膠上樣液(gel loading solutions)

6×堿性凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量

0.3 N 氫氧化鈉 6 mmol/L EDTA 18%聚蔗糖(400型) 0.15%溴甲酚綠 0.25%二甲苯青FF 水  300ul 10N 氫氧化鈉 120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1.8g 15mg 25mg 補足到10ml  

6×聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚藍 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15%聚蔗糖(400型) 水  1.5ml 1%溴酚藍 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1.5g 補足到10ml  

6×溴酚藍/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

0.25%溴酚藍 0.25%二甲苯青FF 15%聚蔗糖(400型) 水  2.5ml 1%溴酚藍 2.5ml 1%二甲苯青FF 1.5g  補足到10ml  

6×甘油凝膠上樣液(4℃貯存)

成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚藍 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50%甘油 水  1.5ml 1%溴酚藍 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 3ml  3.9ml  

6×蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚藍 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水  1.5ml 1%溴酚藍 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 4g  補足到10ml  

10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

0.2%溴酚藍 0.2%二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油  水  20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10% SDS 5ml 補足到10ml  

三、常用抗生素

1.  氨芐青霉素(ampicillin)(100 mg/ml)

溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

2.  羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)

溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

3.  甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)

溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長培養基。

4.  卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)

溶解100mg卡那霉素于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

5.  氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)

溶解250mg氯霉素足量的無水乙醇中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

6.  鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml)

溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

7.  萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)

溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

8.  四環素(tetracyyline)(10mg/ml)

溶解100mg四環素鹽酸鹽于足量的水中,或者將無堿的四環素溶于無水乙醇,定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光,于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

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