微載體細(xì)胞培養(yǎng)法

1.微載體選擇：先用利用三種小量微載體做培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，觀察細(xì)胞在一定時(shí)間內(nèi)細(xì)胞的吸著率和計(jì)算細(xì)胞數(shù)，以得到zui大量細(xì)胞為佳。

2.水化：稱一定量的微載體放入容器中，按每克微載體加50～100ml的比例，加入無Ca2＋和Mg2＋的磷酸緩沖液（PBS），室溫下放置應(yīng)不少于3小時(shí)，并不時(shí)輕微攪動(dòng)，然后再用新鮮PBS洗一次。

3. 消毒：可采用高壓蒸汽消毒，也可在水化后用70％酒精浸泡消毒，再用無菌的PBS漂洗一二次。

4.傳代培養(yǎng)：在連續(xù)進(jìn)行微載體培養(yǎng)時(shí)，可以不必把細(xì)胞從微載體分離下來，可將帶有細(xì)胞的微載體和新的微載體混合進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞能移動(dòng)到新載體上。如果進(jìn)行其它實(shí)驗(yàn)或需要分離細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，和常規(guī)培養(yǎng)相同，先用EDTA＋胰蛋白酶溶液作用使細(xì)胞脫離微載體表面。細(xì)胞脫離微載體后，可用自然沉降法，即在室溫下靜止5分鐘，微載體將先自沉在底部，細(xì)胞大部分仍在上清中，然后離心上清即可得到細(xì)胞。如果需要分離程度較高時(shí)，需用孔徑為100微米的尼龍網(wǎng)或不銹鋼網(wǎng)過濾后，再離心濾過液，就可得到較純凈的細(xì)胞。

生物試劑的使用常識(shí)：

（1）試劑切忌與手接觸（有些試劑有強(qiáng)腐蝕性、等特性）。

（2）要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，不允許用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。取完一種試劑后，應(yīng)將工具洗凈（藥勺要擦干）后，才可取用另一種試劑。

（3）試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后請及時(shí)將瓶放回原處，以免遺忘，帶來不便。

（4）已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內(nèi)（怕產(chǎn)生原試劑的再次污染）。