培養基必須含有細菌生長繁殖所需要的營養物質。所用的化學藥品必須純凈，稱取的份量務必準確。酸堿度應符合細菌生長要求。按各種培養基要求準確測定調節pH值。多數細菌生長的適宜pH值為7.2～7.6，呈弱堿性。

營養均衡：六大營養物缺一不可。部分生物還有特殊的要求；營養物質的配比；酸堿度。

培養基配制時的質量控制

容器：配制和分裝培養基的燒瓶，平皿或試管等器材應為中性，無酸，堿抑制物殘留，平皿底部要平，以免瓊脂厚薄不一，影響藥敏試驗結果。

成分來源：各種成分來源可靠，不含對目的菌生長有抑制的物質。特殊要o/f試驗），除加入葡萄糖外，不能含o/f試驗的假陽性。培養基配制用水應是蒸餾水。

pH值調整：根據培養基的不同要求調整pH 值，控制在要求范圍的±0.2之內。應當注意，培養基在高壓滅菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矯正時應比實pH值高0.1～0.2。

滅菌：根據培養基所含成分及配制數量的不同，選擇不同的滅菌方式，既要達到滅菌效果，又不破壞培養基成分。一般對穩定的培養基，如mh瓊脂、營養瓊脂可用高壓滅菌，即121℃15min ；而含糖的培養基則以108℃滅菌為好，以防止糖類破壞。不耐高熱的物質如血清、牛乳等，可采用間隙滅菌法滅菌。

分裝：根據使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養基所用的平皿、試管要求清潔，不殘留酸堿；制備平板培養基時，操作臺要水平，以避免瓊脂平板厚薄不一，同時確保無菌操作。

培養基配制后的質量控制

培養基外觀情況：包括顏色、透明度、有無沉淀和凝固。如發現培養基表面有裂紋或與培養皿的邊緣分離，說明培養基有脫水現象，必須丟棄。

無菌試驗：每一批配好的培養基均須進行無菌試驗。先滅菌后分裝的培養基，可采用抽樣方法試驗，少于 100 個樣本通常選取 5%～10%的量，如果配制大量培養基，則任意選取 10 個培養基；無菌分裝培養基則需全部做無菌試驗。樣本在 35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養，如培養基含有血液，則需再置于室溫 1 天，以檢查嗜冷菌。選擇性培養基因含有抑制物質，能抑制許多微生物，因此，可加入 10 倍量的無菌液體培養基，稀釋抑制物質，以利于檢出污染菌。即使做過無菌試驗，接種時，也要檢查每個平板上的可見菌落。

性能測試：每一批新制或新購的培養基，使用前均須取已知性質的庫存菌種進行性能測試。培養基按目的不同可分為增菌培養基、分離培養基和鑒定培養基。

①增菌培養基：接種少量難以生長的細菌，在一定時間內觀察增菌情況，細菌能生長的最小接種濃度越小，說明增菌培養基性能愈好。

②分離培養基：要求目的菌生長良好，非目的菌被抑制。一般要求生長的目的菌接種量不可過多，較好的方法是將測試菌調成 0.5 麥氏濁度的菌懸液，再用 0.001ml 的標準接種環涂劃在培養基上，觀察菌落生長。

③鑒定培養基：應選擇具有典型特征的菌株作性能試驗。如三糖鐵瓊脂，須用弗勞地枸櫞酸桿菌、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌 3 種菌分別接種 3 支培養基，若反應結果為斜面產酸/高層產酸、硫化氫陽性，斜面產堿/高層產酸，斜面產堿/高層產堿，質量才算合格。