MTT 溶液(5mg/ml)
產品簡介：
MTT 比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。 MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。 MTT 檢測原理在于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍紫色 Formazan 并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。 在特定溶劑 (如 DMSO)存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標儀可以測定 570nm 波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。
產品組成：
名稱 規格 | 10ml | Storage |
MTT solution(5mg/ml) | 10ml | -20℃避光 |
產品說明書 | 一份 | |
自備材料：
1、 細胞培養液
2、 胰蛋白酶消化液
3、 低速離心機
4、 96 孔培養板
5、 細胞計數板或計數器
6、 DMSO 或 Formazan solvent
7、 搖床
8、 顯微鏡
9、 酶聯免疫檢測儀
操作步驟(僅供參考)：
1、 細胞用含血清的培養液培養至對數生長期， 常規胰蛋白酶消化液消化細胞(懸浮細胞無需
消化)。
2、 低速離心，收集細胞沉淀。
3、 用培養液重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸液，并計數。
4、 細胞接種于 96 孔培養板，一般接種密度為 3000～10000 /孔。通常細胞增殖實驗每孔
加 3000 個細胞，細胞毒性實驗每孔加入 6000 個細胞即可。具體每孔所用的細胞的數
目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定。
5、 37℃ 5%CO2 繼續培養或按照實驗具體需要進行培養，一般培養 6～24h。
6、 按照實驗具體要求，給予 0～20ml 干預藥物處理，37℃ 5%CO2 繼續培養至合適時間。
7、 棄培養液，每孔加入 10ml MTT solution 和 100ml 新鮮培養液，在細胞培養箱內繼續
孵育 4h。
8、 棄培養液，每孔加入 110ml DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結晶物充分溶解 。
8、 棄培養液，每孔加入 110ml DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結晶物充分溶解 。
如果紫色結晶較小或較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結晶較大或較多，溶解的時
間會長一些。
9、 在酶聯免疫檢測儀 570nm 測定 各孔吸光度。
注意事項：
1、 MTT solution(5mg/ml)盡量減少反復凍融的次數，以免失效 ，當顏色變為灰綠色時，
請勿使用。
2、 由于使用 96 孔板進行檢測，如果細胞培養時間較長，應注意蒸發問題。
3、 MTT solution 在低溫情況下會凝固，使用前請置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解
后使用。
4、 觀察 formazan 是否*溶解，亦可以借助 光學顯微鏡觀察。
5、 培養細胞時盡量細菌避免污染。
6、 應注意設立 OD 調零孔和對照。
7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期： 12 個月有效。
