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PCR方法操作中的注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):555 更新時(shí)間:2020-09-07

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction),簡稱PCR,是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA-片段。可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。

PCR是實(shí)驗(yàn)室常用的實(shí)驗(yàn)方法,那么在PCR方法操作中,需要注意哪些事項(xiàng)呢?今天小編帶您了解一下。

配 膠

1.電子稱的使用,要時(shí)刻注意保持電子稱的精確性,保持清潔,根據(jù)不同的濃度的膠稱瓊脂糖。

2.加 TAE(化學(xué)試劑)的量要適當(dāng),以免配出來的膠太薄導(dǎo)致膠孔太淺或濃度太低。

3.倒膠前膠托一定要洗干凈,并擦干;倒膠時(shí)要待膠冷到一定溫度搖勻盡量不要產(chǎn)生氣泡。若膠液的溫度太高要頂在膠托防止膠托變形。

點(diǎn)樣電泳

1.loading要點(diǎn)均勻,控制在 1~2ul的量,并做好對應(yīng)標(biāo)記。

2.加樣時(shí),槍頭要上緊,吸樣均一準(zhǔn)確,排液時(shí)吸頭不要有殘留。

3.點(diǎn)樣前-好檢查待用膠是否合格;點(diǎn)樣時(shí)要對準(zhǔn)膠孔,盡量點(diǎn)完所有的樣。

4.點(diǎn)完樣勿忘點(diǎn) marker并擺正膠位,電泳儀正負(fù)極不要插反,電泳槽的蓋子要蓋緊。

染 色

1.碰到 EB(化學(xué)試劑)的手套要及時(shí)丟棄。

2.EB液要適時(shí)跟換,盤子要清洗。

3.抹布要嚴(yán)格區(qū)分,不可交叉使用

凝膠圖像分析儀的使用

1.使用前要注意清潔,以免影響膠圖的清晰度。

2.照膠時(shí)盡量減少開紫外燈的時(shí)間。

3.拍照時(shí)先關(guān)攝像頭再關(guān)紫外燈,不可顛倒,嚴(yán)格按照照膠的流程進(jìn)行。

4.照好的膠及時(shí)丟棄。

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