遠慕實驗：細胞制備流程及轉化方法
點擊次數：490 更新時間：2022-06-01
細胞制備流程及轉化方法
1. 轉移0.2-1ml培養物至裝有500ml LB(或其他營養豐富的培養基)的1-2升搖瓶
2. 37°C下劇烈振蕩培養2-6小時
3. 定時監控OD600值(培養1小時后每半小時測定一次)
4。 當OD600值達到0.5-1.0時，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘(需要的話這種方式可以存放培養液數小時)
5. 細胞在4°C 5000g下離心15分鐘，棄上清液(如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天)
6. 用滅菌的冰水重懸浮細胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細胞于少量體積中(幾毫升)，然后加水稀釋至離心管的2/3體積。
7. 照上面步驟重復離心，小心棄去上清液
8. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細胞
9. 離心，棄上清液
10. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細胞
11. 照上面步驟離心，小心棄去上清液(沉淀可能會很松散)
12. 用10%甘油重懸浮細胞至zui終體積為2-3ml
13. 將細胞按150μl等份裝入微量離心管，于-80°C保存
遠慕優勢：
1，全：公司提供上萬種產品，涵蓋了生物試劑，elisa試劑盒，標準品，培養基，原裝耗材等，基本上各種科研所需產品在我司都能找到。
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4，品牌多：公司代理的試劑品牌：Amresco、Sigma、Fluka、Alfa、TCI、Merck等進口品牌，國產品牌我們價格更優，我們供應優級純，分析純，化學純，試劑級，基準試劑，實驗純，教學試劑，高純試劑，色譜純，光譜純，電子純等試劑級別（可根據客戶需求定制）。
5，售后：我公司具有優質的技術團隊，產品一旦售出，實驗過程中遇到困難可提供在線技術咨詢。使您使用產品時沒有任何的后顧之憂。
試劑處理提示：
1、購買后，請務必確認標簽上的注意事項。
2、做好預防顛倒，摔壞的措施和管理體制。
3、在使用前再次確認標簽上的注意事項。做好必要的安全對策。
4、對沒有標明其危險特性，有害特性的，也要慎重地進行操作。
5、必須戴好防護用具，小心翼翼進行操作。
6、請參照相關法規，文獻，MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進行安全操作。
7、通常購買試劑時要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話，要更加注意其保管和管理。
8、萬一試劑操作者并非專業技術人員。必須在專業人士的指導監督下進行操作。
9、對于使用后的廢棄物，不要或舊的試劑，應按照相關法律法規正當處理。
細胞制備流程及轉化方法：
1. 轉移0.2-1ml培養物至裝有500ml LB(或其他營養豐富的培養基)的1-2升搖瓶
2. 37°C下劇烈振蕩培養2-6小時
3. 定時監控OD600值(培養1小時后每半小時測定一次)
4。 當OD600值達到0.5-1.0時，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘(需要的話這種方式可以存放培養液數小時)
5. 細胞在4°C 5000g下離心15分鐘，棄上清液(如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天)
6. 用滅菌的冰水重懸浮細胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細胞于少量體積中(幾毫升)，然后加水稀釋至離心管的2/3體積。
7. 照上面步驟重復離心，小心棄去上清液
8. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細胞
9. 離心，棄上清液
10. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細胞
11. 照上面步驟離心，小心棄去上清液(沉淀可能會很松散)
12. 用10%甘油重懸浮細胞至zui終體積為2-3ml
13. 將細胞按150μl等份裝入微量離心管，于-80°C保存
