酶抑制劑是一種分子結合于酶并降低它的活性。通過與酶的活性位點結合，抑制劑降低了底物與酶的相容性，從而抑制了酶-底物復合物的形成，阻止了反應的催化作用，并減少了（有時為零）反應。可以說，隨著酶抑制劑濃度的增加，酶活性的速率降低，因此，產物的產生量與抑制劑分子的濃度成反比。由于阻斷酶的活性可以殺死病原體或糾正代謝失衡，許多藥物是酶抑制劑。

它們還用于殺蟲劑中。并非所有與酶結合的分子都是抑制劑。酶激活劑與酶結合并增加其酶促活性，而酶底物在酶的正常催化循環中結合并轉化為產物。

抑制劑的結合可以阻止底物進入酶的活性位點和/或阻止酶催化其反應。抑制劑結合是可逆的或不可逆的。不可逆抑制劑通常會與酶反應并進行化學改變（例如，通過共價鍵形成）。這些抑制劑修飾了酶促活性所需的關鍵氨基酸殘基。相反，可逆抑制劑非共價結合，并且取決于這些抑制劑是否結合酶，酶-底物復合物或兩者結合而產生不同類型的抑制。

許多藥物分子是酶抑制劑，因此它們的發現和改進是生物化學和藥理學研究的活躍領域。藥用酶抑制劑通常由其特異性（缺乏與其他蛋白質的結合）和效力（其解離常數，表示抑制該酶所需的濃度）來判斷。高的特異性和效力確保藥物幾乎沒有副作用，因此毒性低。