菌株的基礎(chǔ)知識(shí)

試驗(yàn)過程中，生物樣本可能是最敏感的，因?yàn)樗鼈兊幕钚院吞匦砸蕾囉诤线m的試驗(yàn)操作和貯藏條件。實(shí)驗(yàn)室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長(zhǎng)特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證。（對(duì)于菌株的驗(yàn)收，復(fù)蘇傳代，使用，必須有規(guī)范化的程序，以保證菌株的標(biāo)準(zhǔn)特性）

微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來自認(rèn)可的國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種收藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株。（一般是ATCC國(guó)內(nèi)也有CMCC，食品相關(guān)的CICC的菌株也可以。）

標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行。從國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種收藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后，即為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株保存時(shí)，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷凍干燥，液氮儲(chǔ)存，超低溫冷凍（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長(zhǎng)菌種保存時(shí)間。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株可用于制備每月或每周一次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。

工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過 5 代（從菌種收藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第 0 代），以防止過度的傳代增加表型變化的風(fēng)險(xiǎn)。1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。必要時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)。

工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。

在這里有些概念需要理順：

標(biāo)準(zhǔn)菌株，這里指的是凍干菌粉。

儲(chǔ)備菌株：復(fù)蘇后的1代培養(yǎng)物。

工作菌株：由儲(chǔ)備菌株轉(zhuǎn)種傳代而來。

實(shí)驗(yàn)室必須建立和保存其所有菌種的進(jìn)出、收集、貯藏、保存、確認(rèn)試驗(yàn)以及銷毀的記錄（有了程序，就應(yīng)該有配套的記錄），應(yīng)有文件化的程序管理菌種（從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株），該程序包括：標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購(gòu)記錄；從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作及記錄；菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代，并做純度、特性等實(shí)驗(yàn)室所需關(guān)鍵診斷指標(biāo)的確認(rèn)，并記錄；每支菌種都應(yīng)適當(dāng)標(biāo)注，注明其名稱、標(biāo)準(zhǔn)號(hào)、接種日期、所傳代數(shù)；菌種生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；菌種保存的位置和條件；其它需要的程序。

標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)活

1、安瓿bai瓶裝微生物菌種開封

1-1、用浸過70％酒精的du脫脂棉擦凈安瓿瓶。

1-2、用火焰將安瓿瓶口加熱滅菌。

1-3、用鑷子將鋁封口撕開。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)

2-1、用無菌吸管，吸取0.3-0.4ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振 蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。

2-2、取約0.2ml菌體懸浮液，移植于指/定的瓊脂斜面培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入指/定的液體培養(yǎng)基內(nèi)（3-4mL），然后在建議的溫度下培養(yǎng)。

三、注意事項(xiàng)

3-1、菌種活化前，請(qǐng)將安瓿瓶保存在5-10℃的環(huán)境下。

3-2、厭氧菌的培養(yǎng)，如無特別說明，自開封至接種完成，均需以無氧氣體充填，以保持厭氧狀態(tài)。

3-3、某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)。