elisa檢測中顯色常見問題的解決
所有檢測孔均無色
原因可能為酶結合物或底物失效、底物漏加(錯加)、陽性對照漏加或錯加,其中以酶結合物失效和底物錯加為常見。查找原因的方法是將酶結合物與底物直接混合,觀察有無顯色;如顯色則提示為陽性對照漏加或底物錯加所致;若不顯色,用新酶結合物與底物混合,觀察有無顯色;不顯色則提示底物失效,顯色提示原用酶結合物失效。在確定底物錯加或失效者,若來加終止液??芍匦孪窗逶亠@色。
所有檢測孔均顯色
原因多為洗板不凈(扎內殘留未結合的酶結合物)或顯色時間過長。洗板是elisa檢測重要環節.應嚴格按說明書進行,可以適當延長浸泡時間、增加洗滌次數l~2次,否則極易導致假陽性(競爭抑制法為假陰性)結果。
質控孔無色
一般為酶結合物活性降低所致(排除底物錯加、失效及漏加質控物)。質控物一般為臨界值的,是確定試驗成功與否的重要依據。陽性對照雖然顯色,但可以發現其吸光度變化較大,該批試驗須重作,防止弱陽性結果的漏檢。
底物有顏色
目前國產elisa試劑盒的色原底物常為A、B兩種液體,分別為一定濃度的雙氧水和四甲基聯苯胺(TMB)或鄰苯二胺(OPD)溶液,他們都不穩定,使用保存不當易產生顏色;在使用時發現有顏色(或各取一滴混合后顯色),說明他們變質或已受污染,必須丟棄。
試劑盒的貯藏應按說明書的要求,在elisa檢測中應嚴格按照elisa的操作規則執行,避免elisa檢測中的常見實驗問題。
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